ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）作為一種經(jīng)典的免疫學(xué)檢測技術(shù)，包含直接法、間接法、夾心法（雙抗夾心法）和競爭法四種主要模式，不同模式適用于不同的檢測需求，合理選擇可顯著提升實(shí)驗(yàn)的靈敏度與準(zhǔn)確性。

　　1.直接法：快速篩查

　　原理：抗原直接包被固相載體，加入酶標(biāo)記抗體一步完成檢測。

　　適用場景：適用于對檢測速度要求高、樣本量大的場景，如臨床急診樣本的初步篩查（如流感病毒抗原檢測）或環(huán)境污染物（如黃曲霉毒素）的快速檢測。

　　優(yōu)勢：操作簡便、耗時(shí)短（僅需1次孵育），但靈敏度較低，且酶標(biāo)抗體種類有限。

　　選擇策略：適用于已知抗原且對靈敏度要求不高的定性或半定量檢測。

　　2.間接法：抗體檢測利器

　　原理：抗原包被后，加入待測抗體，再通過酶標(biāo)二抗放大信號。

　　適用場景：廣泛用于血清學(xué)診斷（如乙肝病毒抗體檢測）、疫苗免疫效果評估（如中和抗體滴度測定）及自身免疫病抗體篩查（如抗核抗體檢測）。

　　優(yōu)勢：靈敏度高（二級信號放大）、可檢測多種同種型抗體，但存在交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。

　　選擇策略：適用于抗體定量或定性分析，尤其適合樣本中抗體濃度較低的場景。

　　3.雙抗夾心法：高靈敏度定量分析

　　原理：捕獲抗體包被固相載體，結(jié)合樣本抗原后，再加入檢測抗體（酶標(biāo)記）形成“夾心”結(jié)構(gòu)。

　　適用場景：臨床診斷中的核心模式，如腫瘤標(biāo)志物（AFP、CEA）、細(xì)胞因子（IL-6、TNF-α）及病原體抗原（HIVp24）的定量檢測。

　　優(yōu)勢：特異性高、靈敏度強(qiáng)（可檢測pg/mL級抗原），但需保證兩種抗體識別不同抗原表位。

　　選擇策略：適用于復(fù)雜樣本中低豐度抗原的精準(zhǔn)定量，尤其適合疾病早期診斷。

　　4.競爭法：小分子檢測利器

　　原理：樣本中的抗原與酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合有的包被抗體，信號強(qiáng)度與樣本抗原濃度成反比。

　　適用場景：小分子物質(zhì)（如藥物、激素、農(nóng)藥殘留）的定量檢測，如三聚氰胺殘留檢測。

　　優(yōu)勢：可檢測缺乏兩個以上抗原表位的小分子，但線性范圍較窄。

　　選擇策略：適用于分子量＜10kDa的小分子物質(zhì)，需通過標(biāo)準(zhǔn)曲線嚴(yán)格校準(zhǔn)。

　　選擇策略總結(jié)

　　定性/半定量：優(yōu)先選擇直接法或間接法。

　　高靈敏度定量：雙抗夾心法為選擇。

　　小分子檢測：競爭法是選擇。

　　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需考慮：樣本類型（血清、細(xì)胞上清、環(huán)境樣本）、目標(biāo)物特性（分子量、濃度范圍）及實(shí)驗(yàn)室條件（設(shè)備、操作復(fù)雜度）。

　　通過合理匹配檢測模式與實(shí)驗(yàn)需求，可大化ELISA技術(shù)的優(yōu)勢，為科研與臨床提供可靠數(shù)據(jù)支持。