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你想要的鼠抗重金屬類單克隆抗體上線了!

 更新時間:2020-07-07    點擊量:1103
   重金屬是一類很重要的污染物,在生物體內(nèi)長期積累不可降解,極其微量的情況下也會產(chǎn)生不良后果。重金屬通過食物鏈蓄積到人體中,可引起各種疾病甚至癌癥,其危害還能遺傳到下一代。
  為了利用抗體庫篩選技術(shù)制備檢測重金屬鉻的單克隆抗體,本鼠抗重金屬類單克隆抗體研究利用整合劑DTPA成功制備了重金屬Cr的*抗原,并利用制備的*抗原結(jié)合噬菌體展示技術(shù)成功篩選到了特異性識別Cr-DTPA的噬菌體抗體Cr-DTPA-VHH4-63。結(jié)果顯示,獲得的抗體親和常數(shù)為1.279x10"L/mol,與載體蛋白BSA/OVA及無金屬抗原DTPA-BSA/0VA均無交叉反應(yīng),與其他金屬離子也沒有交叉反應(yīng),特異性強。利用制備的Cr-DTPA噬菌體抗體初步建立了ELISA免疫檢測法,其方法低檢測限達到1ug/L,水樣加標(biāo)回收試驗平均回收率90%-114%6,達到國家飲用水檢測標(biāo)準(zhǔn),可用于農(nóng)業(yè)淄溉用水及生活飲用水中的重金屬鉻的檢測。
  本鼠抗重金屬類單克隆抗體研究以谷胱甘肽(GSH)作為雙功能螯合劑偶聯(lián)Hg2+和匙孔血藍蛋白(KLH),獲得*抗原KLH-GSH-Hg2+。用該抗原在佐劑的輔助下免疫BALB/C小鼠。免疫5次后,用間接ELISA方法檢測免疫小鼠抗血清,含Hg2+抗原(BSA-GSH-Hg2+)檢測OD值遠大于無Hg2+抗原(BSA-GSH)。此后經(jīng)過細(xì)胞融合、雜交瘤篩選以及克隆化等步驟,建立了穩(wěn)定分泌抗重金屬Hg2+的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株2C3,后用小鼠體內(nèi)誘生法生產(chǎn)抗Hg2+腹水型單抗,其效價為1:51200。
 
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