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玉米赤霉烯酮免疫親和柱的制備方法有哪些?

 更新時(shí)間:2024-06-16    點(diǎn)擊量:374
  玉米赤霉烯酮免疫親和柱是一種實(shí)驗(yàn)室分離、純化、檢測玉米赤霉烯酮的常用工具。赤霉烯酮是一種由真菌產(chǎn)生的毒素,它的存在可能導(dǎo)致玉米等農(nóng)作物的大量死亡,而且容易引起人畜的食物中毒,因此需要對(duì)其進(jìn)行檢測。
 
  玉米赤霉烯酮免疫親和柱的制備方法主要包括以下幾個(gè)步驟:
 
  1、選擇抗體:首先需要選擇一種對(duì)玉米赤霉烯酮具有高親和力和特異性的抗體。這種抗體可以通過篩選雜交瘤細(xì)胞庫或者通過基因工程手段獲得。
 
  2、抗體固定化:將選定的抗體通過化學(xué)鍵合或者物理吸附的方式固定在載體上。常用的載體有瓊脂糖、硅膠、聚苯乙烯等。固定化的方法包括共價(jià)鍵合、離子鍵合、疏水作用、金屬螯合等。其中,共價(jià)鍵合法是常用的方法,如使用溴化氰活化的瓊脂糖凝膠作為載體,將抗體通過其氨基與載體上的活性基團(tuán)發(fā)生反應(yīng),實(shí)現(xiàn)抗體的固定化。
 

玉米赤霉烯酮免疫親和柱

 

  3、裝柱:將固定化抗體的載體填充到柱子中,形成一個(gè)免疫親和柱。柱子的大小和形狀可以根據(jù)實(shí)際需求進(jìn)行調(diào)整。裝柱時(shí)要保證載體在柱內(nèi)的分布均勻,避免出現(xiàn)空洞或者堆積現(xiàn)象。
 
  4、封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn):為了減少非特異性吸附,需要在柱子中加入一定濃度的封閉劑,如牛血清白蛋白、明膠等。封閉劑可以與載體上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合,從而降低背景噪音。
 
  5、樣品處理:將含有玉米赤霉烯酮的樣品經(jīng)過適當(dāng)?shù)那疤幚?,如離心、過濾、稀釋等,使其適應(yīng)要求。然后將處理后的樣品加入到玉米赤霉烯酮免疫親和柱中,使玉米赤霉烯酮與固定化的抗體發(fā)生特異性結(jié)合。
 
  8、免疫親和柱的再生:為了延長其使用壽命,需要進(jìn)行再生處理。通常采用高濃度的鹽溶液或者酸堿溶液對(duì)柱子進(jìn)行清洗,去除殘留的雜質(zhì)和抗體。再生后的可以重復(fù)使用多次。
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